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サンプル中の微生物の濃度を決定する古典的な方法の1つは、サンプルを希釈し、プレート上で微生物を成長させ、コロニーを数えることです。播種された微生物は、1つまたは複数の細胞で構成されるコロニー形成単位から成長して、目に見えて数えることができる目に見えるコロニーになります。細菌は、プレートカウントを使用して評価する最も一般的な微生物です。コロニー数は、土壌、水、食物中の微生物を検出して数えるために使用されます。コロニーを数えるためのプロトコルは、正確で系統的なアプローチを強調しています。
サンプルの希釈、メッキおよびインキュベーション
単に寒天プレートに微生物サンプルを塗抹すると、非常に多くのコロニー形成単位が見られるため、個々のコロニーが混ざり合い、数えられなくなります。この問題を解決するには、サンプルを液体培地に混ぜ、少量の混合物を取り、さらに希釈します。このプロセスを6〜10回繰り返します。寒天プレートに最終希釈液を広げ、コロニーを数える前に4〜7日間インキュベートします。
手動カウント
コロニーをカウントする際の主なトリックは、各コロニードットを1回カウントすることです。 1つのアプローチは、グリッドの背景にペトリ皿をセットし、各グリッドセルのコロニーをカウントし、すべてのセルを整然としたパターンで移動することです。ペトリ皿の裏に数えられたコロニーをマークすることも有用なアプローチです。通常、少なくとも3つのプレートを数える必要があります。堅牢な推論を行うために、30〜300コロニーを含むプレートのみを使用することを、ラボおよびメーカーにコンサルティングサービスを提供するMicrobiology Networkが示唆しています。数が多すぎたり、コロニーが少なすぎるコロニーがあるプレートは、新しい希釈液から再プレートする必要があります。
自動カウント
人為的エラーは、コロニーを手動でカウントするのにかかる時間を増やします。精度と効率の両方を改善するには、ペトリ皿を自動化されたコロニー計数装置に入れます。自動化されたコロニーカウンターは皿の画像を取得し、背景からコロニーを分離し、アルゴリズムを使用してプレート上のコロニーをカウントします。アルゴリズムは、2つ以上のコロニーが端で接触している場合、コロニーを区別するのが困難な場合があるため、これは現在進行中のソフトウェア開発の領域です。
カウントをさらに複雑にする
コロニー数から微生物密度を計算する精度には、いくつかの制限があります。コロニー形成単位は、単一の細胞、細胞の鎖、または細胞の全体の塊であり得る。コロニーは1つの細胞を表すため、コロニー数から計算された濃度は低くなる可能性があります。異なる微生物は異なる成長条件を必要とし、プレート上のコロニーは、それらのインキュベーション条件下でその成長培地で繁殖する微生物のみを表します。さらに、コロニーカウントでは死細胞は記録されません。これは、元のサンプルに細胞の濃度が必要な場合に重要な考慮事項です。