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高速液体クロマトグラフィー（HPLC）は、化合物の分離と同定に使用される実験室の手法です。これは、化合物を分離するために溶液中の化合物の異なる極性に依存するカラムクロマトグラフィーの一種です。 HPLCは、圧力を使用して溶液をより速くカラムに通すため、標準のカラムクロマトグラフィーとは異なります。したがって、より高速で、より正確な結果が得られます。目標は、カラム内の化合物を分離し、それらを個別に終了させることです。
共溶出
HPLCの速度と化合物の異なる極性に依存しているため、類似の構造と極性を持つ2つの化合物は、同時にまたはほぼ同時にクロマトグラフィー装置から排出されます。これは共溶出として知られています。共溶出により、混合物のどの部分がどの時点で溶出したかを正確に判断することが難しくなります。
吸着化合物
HPLCは通常、異なる材料で作られたビーズで満たされたガラスカラムを使用します。カラムに押し込まれる混合物には、異なる強度でビーズに結合する化学物質が含まれています。極性の類似性に依存する結合の強度は、化学物質が放出される前にビーズに結合する時間を決定します。一部の化合物は非常に強く結合するため、カラム内のビーズから本質的に放出されることはなく、カラムを出る溶液で測定されることもありません。
コスト
典型的な実験室での分離技術には、アッセイまたは分離方法を開発し、そのアッセイを実行して溶液から個々の化合物を分離することが含まれます。ただし、これは通常、手順を実行する必要がある複数のソリューションになり、複雑さが指数関数的に増加します。 HPLCは多くの場合、このプロセスを簡素化および高速化できますが、HPLC装置の開発コストは莫大になる可能性があります。 HPLC装置の開発は、はるかに効率的ですが、化合物を分離するための他のアッセイを開発するよりもはるかに費用がかかります。このため、多くの小規模な個人所有の研究所では経済的に実行不可能です。
複雑
HPLCは、単純な化合物の分離に使用されるだけでなく、細胞混合物から特定のタンパク質を分離するためにも使用されます。この場合、カラム内のビーズは通常、収集する必要のあるタンパク質に特異的な抗体でコーティングされています。タンパク質は抗体に結合し、残りの溶液はカラムを通過し、その後、別の溶液を使用してタンパク質が放出され、収集されます。これには、高度に熟練した技術者が常に列を監視し、プロセスが計画どおりに実行されていることを確認する必要があります。