ゲル電気泳動ラボの手順

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著者: Louise Ward
作成日: 11 2月 2021
更新日: 19 11月 2024
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電気泳動 高校生物実験 アガロースゲル電気泳動 原理と実際
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ゲル電気泳動は、実験室でDNAの鎖を測定および分類するために使用される方法です。通常の条件下では、ほとんどの顕微鏡を使用して表示した場合でも、操作するにはDNAが小さすぎるために必要です。ゲル電気泳動ラボは比較的簡単な手順を使用し、同じ基本的な手法を使用して個々のタンパク質を分離することもできます。

ゲルマトリックス

ゲル電気泳動手順を開始するには、まずゲルを作成する必要があります。通常、ゲルはアガロースと呼ばれる物質を使用して薄いシートで作成されます。粉末状のアガロースをフラスコに入れ、続いてバッファーと呼ばれる塩水溶液を入れます。このアガロースと緩衝液の混合物は、2つの物質が一緒に溶けるまで加熱され、成形型に流し込まれます。次に、ゲルが冷える前に、コームと呼ばれる器具を型の一方の端に置きます。ゲルが冷却されると、櫛が取り除かれ、DNAサンプルを保持するために使用される小さなスロットが残ります。

冷却されたアガロース混合物(ゲルマトリックスと呼ばれる)の特別な特性は、塩水で作成されるという事実に由来します。帯電すると、マトリックスは導電性になり、その長さに沿って電気が流れるようになります。ゲルマトリックスのもう1つの特別な特性は、規則的な微細な穴の存在です。これらの穴により、DNA鎖がゲルマトリックスを通過し、選別プロセスが容易になります。

電気泳動チャンバー

次のステップは、電気泳動チャンバーを作成することです。これは小さな長方形の箱で、両端にプラスとマイナスの電気接続があります。通常、チャンバーは浅く、卓上に収まるほど小さく、プレキシグラスなどの透明な素材で作られています。

塩水溶液を電気泳動チャンバーの底に注ぎ、ゲルマトリックスをこの溶液内にわずかに沈めます。塩水には2つの目的があります。電気の流れを助け、ゲルマトリックスをしっとりと保つことです。 DNAは負の電荷によって推進されるため、サンプルが負の電気接続の隣に配置されるようにマトリックスを配置します。

DNAの準備

次にDNAサンプルを準備します。溶液中のDNAはほとんど見ることができないため、個々のサンプルにはローディングバッファーと呼ばれる着色剤が添加されます。また、この薬剤はDNA溶液を増粘し、流動性を低下させ、実行しやすくします。ピペットを使用して、DNA溶液のサンプルをゲルマトリックスの各交互スロットに移します。各サンプル間の空のスロットに、実験の制御と比較のために、長さがすでにわかっているDNAの溶液(DNA標準と呼ばれる)を入れます。

電源を入れる

次に、電気泳動チャンバーの電源を入れます。負の力の下では、DNAサンプルはチャンバーの長さ全体にわたって強制されます。 DNAの小さな鎖は、ゲルマトリックス内をより速く移動し、短時間で、より長くより遅い鎖から分離します。着色剤の染料により、DNAの軌跡をたどることができます。 DNAの個々の鎖を見ることができませんが、同じ長さの鎖は一緒に凝集します。

最終ステップ

DNAが選別されると、電気泳動チャンバーからマトリックスが除去されます。次にDNAを染色して、測定と検査を容易にします。