電気泳動でにじみの原因は何ですか?

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著者: Judy Howell
作成日: 1 J 2021
更新日: 1 J 2024
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おうち生物 28.  PCR法と電気泳動 (高校生物)
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科学者があなたのDNAのような小さな断片をどのように研究するのか疑問に思ったことはありませんか? 1つの方法はゲル電気泳動です。電気泳動は通常、科学的解釈に最適な明瞭で読みやすいバンドを生成しますが、不鮮明な結果はデー​​タをあいまいにする場合があります。

TL; DR(長すぎる;読まなかった)

ゲル電気泳動により、科学者は消化されたサンプルを視覚化し、断片のサイズを測定できます。不適切に調製されたアガロースゲル、希釈されていないサンプルをウェルにロードする、または低品質のサンプルを使用することにより、スミアリングが生じます。

電気泳動とは?

ゲル電気泳動は、科学者がDNAなどの小分子の消化サンプルを視覚化し、それらの断片のサイズを推定する方法です。電気泳動を行うために、科学者はアガロースを熱湯に懸濁してゲルを調製します。結果として生じる重合により、交差した糖ポリマーが生成されるため、ゲルは化学レベルではspの巣のように見えます。

科学者は、切断器具を使用してゲルにウェルを形成し、非常に少量の消化サンプルをウェルにロードできます。マシンの電源を入れると、ゲルに電気が流れ、サンプル内の断片がウェルからゲルの反対側に移動し始めます。ゲルはウェブ状であるため、小さな断片はマトリックスをすばやく移動しますが、大きな断片はマトリックスを登るのに時間がかかります。終了すると、ゲルには異なる断片がどれだけ移動したかを表す暗い帯が含まれます。科学者はこれらのバンドを測定し、対数計算を使用して、移行した距離に基づいて各フラグメントのサイズを決定します。

科学者は明確なバンドを望んでいますが、バンドがにじむことがあります。このスミアリングは、通常、ゲルの調製が不十分であり、希釈されていないサンプルをウェルまたは低品質のサンプルにロードした結果です。

不十分なゲル調製

不鮮明な結果になると、犯人の1つは調製が不十分なゲルです。満足のいくゲルが均一に重合し、キャスティングトレイのゲル全体に均一なマトリックスが生成されます。科学者がトレイ全体の注液を完了する前にゲルの一部(通常は下半分)が固まると、得られるゲルは不均一になり、結果が不鮮明になります。

サンプルが多すぎる

ウェルにサンプルをロードする前に、それらのサンプルは、ウェルからあふれることなくゲルを通過するのに十分に希釈されている必要があります。科学者がサンプルを希釈するのを忘れたため、または不適切な希釈係数を使用したためにロードされたサンプルが濃縮されすぎると、断片がウェルに対して大きすぎてスミアリングが発生します。

低品質のサンプル

スミアリングは、サンプルの質が低いことからも生じます。たとえば、タンパク質で汚染されたDNAサンプルや塩分が多すぎるDNAサンプルは、スミアリングを引き起こす可能性があります。劣化したサンプルや変性したサンプルも、バンドの汚れなどの悪い結果をもたらします。

ゲル電気泳動は、消化されたサンプルを視覚化し、フラグメントサイズを決定するための科学者にとって驚くべき方法です。ゲルとサンプルの両方を注意深く準備することで、スミアリングの可能性を最小限に抑え、科学的解釈に最適な透明なバンドを生成します。