溶解バッファーの成分

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著者: Laura McKinney
作成日: 4 4月 2021
更新日: 18 11月 2024
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天びんを使用した緩衝液の調製
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Lyseはギリシャ語から来た単語で、単に「分割する」または「破裂する」ことを意味します。適切な用語は、溶解バッファー内の細胞に何が起こるかに関するものです。科学者は、特に細菌の場合、分析のために細胞からDNAまたはタンパク質を抽出するときに溶解バッファーを使用します。細胞溶解バッファーのタイプは、実験の種類によって異なりますが、一般的な選択肢は次のとおりです。

TL; DR(長すぎる;読まなかった)

溶解バッファーは、開いている細胞を破壊するのに役立つため、その内容にアクセスしたり削除したりできます。いくつかの例には、塩、洗剤、キレート剤と阻害剤、およびいくつかのアルカリ性化学物質が含まれます。

緩衝液および塩

細胞が分裂する間、バッファーはpHを安定させます。 Tris-HCLは、pH 8で緩衝するための最も一般的な化学物質の1つです。HEPESは、これらの実験における別の一般的な緩衝化学物質です。塩化ナトリウム塩は、細胞外の溶質の総濃度であるイオン強度も高める可能性があります。水は低溶質濃度の領域から高溶質濃度の領域へと細胞膜を横切って拡散する可能性があるため、この最後のポイントはある程度重要です。

洗剤の溶解

洗剤は細胞膜を溶解するため、細胞の内容物は逃げることができます。両親媒性の分子構造(つまり、一方の末端が水分子と容易に相互作用し、他方の疎水性または「水を恐れる」末端は相互作用しない分子)。彼らはミセル、洗剤分子の疎水性尾部が脂肪分子に向かって内側を指す小さなクラスターを形成することにより、脂肪を溶解することができます。一般的な洗剤には、ドデシル硫酸ナトリウム、またはSDS、NP-40、およびtritonXが含まれます。

キレート剤と阻害剤

溶解バッファーには通常、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)またはエチレングリコール四酢酸(EGTA)などのキレート剤も含まれます。これらの化学物質は、2つの正電荷(たとえば、マグネシウムとカルシウム)で金属イオンに結合するため、他の反応に使用できなくなります。多くのDNAses(DNAを噛むタンパク質)およびプロテアーゼ(他のタンパク質をスライスするタンパク質)は機能するためにマグネシウムイオンを必要とするため、EDTAおよびEGTAはこれらの重要な成分を奪うことにより、プロテアーゼまたはDNAse活性のレベルを下げるのに役立ちます。しかし、彼らはそれを完全に排除してはおらず、一部のプロテアーゼはマグネシウム補因子に依存していないため、溶解バッファーにはプロテアーゼ阻害剤と呼ばれる化学物質が含まれることがあり、プロテアーゼに結合し、適切に機能しないようにします。

アルカリ溶解

細菌からプラスミドを精製するための非常に一般的な手法であるアルカリ溶解には、3つの解決策があります。最初のものには、グルコース、トリスHCLバッファー、EDTA、およびRNAが含まれます。グルコースはバクテリアの外側に高い溶質濃度を作り出すので、バクテリアは少したるんでなり、溶菌しやすくなります。 EDTAとtris-HCLは既に説明したように機能しますが、RNAseは細胞内のRNAを噛んで邪魔にならないようにします。 2番目のソリューションは、実際に細胞を溶解します。これにはSDS界面活性剤とNaOHが含まれており、pHを12以上に上げ、細胞内のタンパク質を変性させ、DNAを一本鎖に分離させます。 3番目の溶液には酢酸カリウムが含まれており、プラスミドDNA鎖が一緒に戻ることができるように、pHをより中性のレベルに戻します。その間に、変性タンパク質は凝集して沈殿しますが、ドデシル硫酸イオンはカリウムイオンと一緒になって不溶性化合物を形成し、これも溶液から沈殿します。