HPLC分解能の計算方法

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著者: Monica Porter
作成日: 20 行進 2021
更新日: 3 J 2024
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【有機化学】カラムクロマトグラフィー column chromatography
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化学者は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を使用して、化合物の混合物を分離します。一般的に、このメソッドは、サンプルをカラムに注入し、そこで1つ以上の溶媒と混合します。さまざまな化合物がさまざまな程度でカラムに吸着または「付着」します。溶媒が化合物をカラムに押し込むと、混合物の成分の1つが最初にカラムを出ます。機器は、化合物がカラムを出るときに化合物を検出し、x軸に保持時間、y軸に検出器からの信号強度のプロットで構成されるクロマトグラムを生成します。化合物がカラムを出ると、クロマトグラムに「ピーク」が生成されます。一般的に、クロマトグラムのピークが離れていて狭いほど、分解能は高くなります。科学者は、適切な分離を表すために1.0以上の解像度を検討します。

    x軸の値が各ピークのベースのどこにあるかに注目して、クロマトグラムの2つの隣接するピークの幅を測定します。 x軸は保持時間を表し、通常は秒単位で測定されます。したがって、ピークが15.1秒で始まり、18.5秒で終わる場合、その幅は(18.5-15.1)= 3.4秒です。

    時間、つまりピークの最大値の位置に対応するx軸上の位置に注目して、保持時間を決定します。この値は、通常、手順1で幅を計算するために使用される2つの値の約半分になります。たとえば、手順1の例では、約16.8秒で最大値を示します。

    2つのピーク間の分解能Rを計算します

    R =(RT1-RT2)/、

    ここで、RT1とRT2はピーク1と2の保持時間を表し、W1とW2はそれらのベースで取られたピークの幅を表します。ステップ2と3の例を続けると、1つのピークは16.8秒の保持時間と3.4秒の幅を示します。 2番目のピークが3.6秒の幅で21.4秒の保持時間を示した場合、分解能は次のようになります。

    R =(21.4-16.8)/ = 4.6 / 3.5 = 1.3