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分光光度計は、溶液中のタンパク質などの特定の化合物の濃度を決定するために使用されます。一般的に、サンプルで満たされたキュベットを通して光が輝いています。サンプルによって吸収される光の量が測定されます。化合物は異なるスペクトル範囲の光を吸収するため、分析には適切な波長を設定する必要があります。分光測光法により未知のサンプルの濃度を計算する方法は数多くありますが、参照標準を使用すると最高の精度が得られます。さらに、標準は、分光光度計が誤動作しているか、分析にその他の問題があるかどうかも示します。
直線方程式による計算
分析の開始時に参照標準を分析します。標準は既知の濃度であり、機器の較正と精度の確認に使用されます。すべてのサンプルは、標準の作業範囲内に収まる必要があります。そうでない場合は、サンプルを希釈するか、標準液の濃度を上げる必要があります。
標準的な濃度と吸光度の測定値で散布図または折れ線グラフを作成します。濃度はy軸に、吸光度はx軸にあります。たとえば、標準は1 ppm、2.5 ppm、および5 ppmです。与えられた吸光度は1 ppm = .25、2.5 ppm = .5、および5 ppm = .75でした。
トレンドラインをフォーマットして、グラフに方程式を表示します。方程式は、式y = mx + bを示します。たとえば、ステップ2の標準を使用すると、式はy = .1224x + 0.1531です。ほとんどのトレンドラインはゼロでインターセプトされますが、分析方法とR 2乗値に依存します。
未知のサンプルを分析し、吸光度の測定値を記録します。
方程式（y = mx + b）を使用して、サンプルの濃度を決定します。