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ゲル電気泳動では、DNAまたはタンパク質のサンプルは、一般的にサイズに基づいて、ゲルを移動する電界をかけることにより分離されます。ゲル電気泳動の使用は生物医学研究室では日常的であり、さまざまな異なる質問に答えるために使用されるため、実際に結果を分析する普遍的な方法はありません。
たとえば、ウエスタンブロッティング、ノーザンブロッティング、およびサザンブロッティングなどのさまざまな手法には、すべてゲル電気泳動が含まれます。
最も一般的な手順であるDNAサンプルのアガロースゲル電気泳動を行う場合、通常、少なくとも2つのことを行う必要があります：1）未切断プラスミドとインサート、ニックの入ったプラスミド、切断プラスミドを区別し、2）さまざまなサイズを推定します標準曲線のExcelまたは計算機を使用したDNAフラグメント。
仕組み
ラボノートを確認して、どのサンプルがどのレーンにロードされたかを判断します。ゲルのウェルをロードしたとき、各レーン/サンプルの識別に注意する必要があります。
どのレーンにDNA標準の「ラダー」が含まれているかを判別します。これらは既知の長さの断片です。それらの移動距離を使用して、標準曲線Excelまたは別の計算機を使用してサンプルフラグメントのサイズを決定できます。
定規を使用して、ウェルから追跡色素までの写真上の距離を測定します。追跡色素は、DNAバンドのどれよりも遠くに移動します（言い換えれば、ゲルの底にあります）。この番号を記録します-あなたが重要でないarentを使用する単位。
井戸から「はしご」の各バンドまでの写真上の距離を測定し、その距離を追跡色素バンドが移動した距離で割ります。この計算により、各バンドの相対的なモビリティが得られます。
例：トラッキングダイバンドが6インチ移動し、5、4.5、3.5インチ移動した3つのバンドがあるとします。
彼らの相対的な可動性は何ですか？回答：5、4.5、3.5を6で割って、0.833、0.75、0.5833の相対移動度を得ます。
ラダー内の各フラグメントのキロベース単位のサイズとともに、スプレッドシートプログラム（Excelまたは使用する他の同様のプログラム）に相対移動度を入力します。
製造元は、各フラグメントのサイズを、提供するラダーで提供していますので、すでにこの情報を持っているはずです。
xに相対的な移動度、yにキロベースのサイズでデータをグラフ化します。
スプレッドシートプログラムでTrendline関数を使用して、方程式をデータに適合させます。この方程式はべき乗方程式（例：x ^ -2）であり、データに比較的よく適合する必要があります（少なくとも0.9のR係数）。これにより、Excelの曲線と標準曲線が作成されます。
サンプルに対応するバンドを見てください。
小さなDNA断片は大きなDNA断片よりもゲル内を遠くに移動するため、トラッキング色素に最も近いDNA断片が最小になることに注意してください。ただし、プラスミド（環状）DNAが切断されていない場合、「スーパーコイル」または電話コードのようにねじれ、実際に移動することに注意してください 遠い 同じサイズの線状DNAより。
同様に、不完全に切断された「ニックの入った」プラスミドは、 より短い 同じサイズの線形DNAよりも距離が長い。そのため、ゲルから未切断プラスミドのサイズを推定することはできません。
各レーンのバンドを、そのレーンにロードしたサンプルのIDと一致させ、表示されているものが期待したものかどうかを判断します。これは実験の性質に依存します。
ただし、一般的に、挿入プラスミドを2つの制限酵素で消化した場合、挿入断片がプラスミドから解放されると予想されます。
プラスミドよりもはるかに小さいため、そのレーンには2つのバンドが見られます。1つは上部付近、もう1つは下部付近です。 1つの制限酵素のみで切断されたプラスミドは、2つの制限酵素で切断されたプラスミドより少し遠くまで移動する単一のバンドのみを形成する必要がありますが、挿入物の近くにはありません。
ウェルからカットされたプラスミドまでの距離を測定し、定規でバンドを挿入します。トラッキング色素が移動した距離でこれらの数値を除算して、インサートと切断プラスミドの相対的な移動度を求めます。
インサートの相対的な可動性をプラグインして、スプレッドシートプログラムが計算した方程式にプラスミドをカットします。この計算により、これらのプラスミドのサイズの推定値が得られます。