酵素は、化学反応を触媒する（速度を増加させる）タンパク質です。ほとんどの酵素の最適温度、または酵素が反応を最も促進する温度は摂氏35〜40度です。このウィンドウ内の温度を上げると、分子が励起され、酵素/反応物が衝突して反応して生成物を生成する速度が上がるため、反応速度が上がります。ただし、温度を上げすぎると、酵素が変性し、機能しなくなることがあります。
生成物の最大速度がいつ発生するかを決定するために、反応を無限量で加熱し、反応の小さなサンプルを採取することにより、最適な酵素温度を決定します。
メソッドを選択します。実験のさまざまなポイントで製品の濃度を測定する方法を決定します。たとえば、分光光度計を使用して吸光度から濃度を計算したり、蛍光を測定して蛍光から濃度を計算したりして、多くの製品の濃度を測定できます。
実験を設定します。反応物と酵素を、シンチレーションバイアルなどのふた付きの小さな容器に入れます。反応が開始されます。室温の大きなビーカーにシンチレーションバイアルを入れます。ビーカーを加熱プレートの上に置きます。ビーカーの中に温度計を置きます。これにより、さまざまなポイントで反応の温度を測定できます。
摂氏約25度の室温で、反応の100マイクロリットルのサンプルを採取します。加熱プレートをオンにします。摂氏30〜40度のさまざまな温度（30.5、31、31.5など）で、反応の100マイクロリットルのサンプルを採取します。
各温度で製品の濃度を決定します。温度が摂氏40度を超えると、酵素が変性するため、基質が生成物に変換される速度が低下します。製品が最大速度で生産されているポイントは、温度が最適になっているポイントです。