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高速液体クロマトグラフィーは、混合物の実験室分析のための技術です。カラムを通して混合物のサンプルを推進するために、単なる重力ではなく高圧を使用する効率的なタイプのクロマトグラフィー。サンプルが注入され、大量の圧力を含むポンプがサンプルを充填されたカラムに沿って移動させ、個々の成分に分離されます。この分離は、検出器によって分析され、結果が得られます。
注射部位
HPLCに注入するためには、まずサンプルを極性液体溶媒、好ましくは既知のHPLCスペクトルを持つものに溶解し、そのデータをサンプルと区別できるようにする必要があります。サンプルを含む溶液は機器に入れられ、カラムに送られます。注射部位の実際の場所は、器具のブランドによって異なります。ほとんどの場合、注入プロセスは自動化されていますが、場合によっては、ラボの労働者が小さな注射針を使用してサンプルを注入する必要があります。
ポンプ部品
HPLCユニットのポンプコンポーネントは、カラムを通してサンプルを推進する圧力を提供するために必要です。ポンプの強度はさまざまですが、強力なものは最大6,000 psi（1平方インチあたりポンド）の圧力を生成でき、サンプルの注入後に適用されます。これにより、重力のみを使用してサンプルを滴下する場合よりも、サンプルがカラムを迅速かつ効率的に通過できます。
列の説明
ポンプによってカラムを通過するサンプルの速度が向上するため、単純な液体クロマトグラフィーで使用されるものとは異なるタイプのカラムを使用できます。カラム内の充填剤の粒子サイズははるかに小さくすることができ、表面積が増加するため、サンプルとカラムの相互作用が促進されます。ほとんどのHPLCカラムは極性によって機能します。サンプルは極性溶媒に溶解し、カラムは主に非極性炭化水素で構成されています。サンプル分子の極性部分は主に溶媒と相互作用しているため、カラムを非常に速く通過しますが、サンプルの非極性成分はカラム内に残り、カラム成分と弱い相互作用を形成します。したがって、サンプル成分は、最も極性の高いものから最も無極性の順にカラムから外れます。
検出器機能
検出器も、使用しているHPLC機器の種類によって異なります。ただし、ほとんどの機能は同じ基本的な方法です。分離されたサンプル成分がカラムから外れると、紫外線源が光ります。ほとんどの有機化合物は一定量の光を吸収するため、適用された光線を通過する際に、検出器は吸収された光の量を検出できます。また、検出器は、カラムから出る順序に基づいてコンポーネントの保持時間を記録します。その後、この出力をピーク面積に基づいて分析し、サンプル成分の正確な性質を判断できます。