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DNA
デオキシリボ核酸とタンパク質。 DNAは遺伝子と呼ばれるユニットに編成され、各ユニットは特定のRNAまたはタンパク質配列をコードします。遺伝子は、生物学的構造と機能、進化、病気、その他の多くの生命システムの側面について学ぶために研究されています。遺伝子を詳細に研究するには、目的の細胞からDNAを分離および精製する必要があります。
DNA抽出
単一の細胞からDNAを抽出して研究することはできますが、肉眼で見るには十分ではありません。スプールに十分な量を取得するには、より多くのセルを使用する必要があります(数百万)。
特定のサンプルの固有の特性を説明するために正確なプロトコルはかなり異なりますが、一般的な手順は均質化、溶解、消化、分離、および収集です。手順は、サンプルのサイズに応じて小さなガラスまたはプラスチックチューブで行うのが最適です。
サンプルは通常、細胞を互いに完全に分離するためにブレンドまたは粉砕されます。これにより、細胞成分が後続の試薬によりアクセスしやすくなります。界面活性剤または酵素をホモジネートに加えて、細胞膜(および細胞が真核生物であれば核膜)を溶解し、DNAを遊離します。この時点で、DNAはタンパク質、脂質、炭水化物など、細胞に含まれている他のものすべてに囲まれています。
タンパク質を分解してDNAに結合せず、タンパク質の収集を妨げるには、さらなる酵素消化が必要になる場合があります。冷たい、純粋な、エチルまたはイソプロピルアルコールを加えることにより、DNAを残りの細胞内容物から分離します。 DNAはこれらのアルコールに溶けないため、凝縮してアルコールとの接触を最小限に抑えようとします。その後、通常は遠心分離または巻き取りによって、凝縮したDNAが収集されます。
DNAスプール
スプーリングによるDNA収集は、抽出手順から大量のDNAが得られる場合に効果的です。純粋なDNAの印象的なもつれがはっきりと見えるため、これは優れたデモンストレーション方法でもあります。
DNAを巻き取るには、慎重に分離ステップを実行する必要があります。以前に添加した溶解試薬混合物の一部ではなかった場合、アルコール添加ステップの前に、濃縮塩溶液(塩化ナトリウム)を溶液に添加する必要があります。冷たいアルコールをゆっくりと試験管の側面に注ぎ、水溶液の上部に層を形成し、混合を避けます。正しく行われた場合、アルコールは塩辛い層の上に独自の層を形成します。次に、スプーリングが来ます。
塩味のある層からDNAを収集するには、チューブの底に触れるまでアルコール層にガラス製の攪拌棒を注意深く置きます。 2つの層の間の界面を見ながら、指の間でゆっくりとロッドを回転させます。十分なDNAが存在する場合、レイヤー間の界面で凝集して乳白色の半透明の塊を形成します。ロッドを回転させてDNAを巻き付け(スプール部分)、チューブから引き出します。 DNAは、保管またはさらなる分析のために、純粋なアルコールの別のチューブに移すことができます。